医学论文：1,25-(OH)2D3干预下哮喘小鼠TIM-4蛋白及mRNA的表达

1,25-(OH)2D3干预下哮喘小鼠TIM-4蛋白及mRNA的表达

[摘要] 目的 通过建立哮喘小鼠气道重塑模型，观察 1,25-(OH)2D3干预下，哮喘小鼠气道结构及T细胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-4（TIM-4）的改变，探讨1,25-(OH)2D3与哮喘气道重塑的关系。方法 BALB/c系雌性小鼠30只，随机分为对照组、哮喘组、1,25-(OH)2D3干预组，卵清蛋白致敏、激发建立哮喘模型。取小鼠肺组织，应用HE染色及免疫组化技术观察气道重塑情况及TIM-4蛋白表达；应用RT-PCR技术检测TIM-4 mRNA的表达。结果 哮喘组发生典型的气道重塑改变，TIM-4表达水平升高（0.650±0.023）；1,25-(OH)2D3干预组较哮喘组气道重塑有所改善，TIM-4表达降低（0.435±0.020） ，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TIM-4可能参与小鼠气道重塑过程，新型免疫调节剂1,25-(OH)2D3可下调TIM-4的表达，改善气道重塑的发生。
[关键词] 哮喘；气道重塑；1,25-(OH)2D3 ；TIM-4；小鼠

1，25-(OH)2D3 down-regulates TIM-4 e*pression in asth
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ory tract remodeling were found in asthmatic group ,with which the TIM-4 increased（0.650±0.023）, asthmatic 1,25-(OH)2D3 group were comparatively decreased （0.435±0.020），the difference has statistically significance. Conclusions TIM-4 presumably related to the mouse respiratory tract remodeling, 1,25-(OH)2D3 is a new type of immune-regulator ,which down-regulated e*pression of TIM-4 to improve respiratory tract remodeling.
Key words : asthma; respiratory tract remodeling; 1,25-(OH)2D3; TIM-4; mice
支气管哮喘是儿童时期呼吸系统最常见的疾病之一，以气道慢性炎症、气道高反应性、气道重塑为基本病理特征，其发病机制复杂，目前尚未完全清楚。1,25-(OH)2D3是维生素D3的活性代谢产物，研究证实，除影响骨钙代谢调节外，还具有免疫调节作用，主要通过活化树突状细胞及单核细胞来影响免疫状态，其作用途径尚未完全清楚[1-2]。T细胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白（T cell immunoglobulin mucin protein,TIM）基因家族是新近发现的基因家族，有研究证实，TIM蛋白家族对Th1/Th2细胞介导的免疫调节应答中，有双向调节T细胞活化的作用，TIM-4主要表达在活化的树突状细胞及巨噬细胞表面，在肿瘤免疫耐受、肾脏缺血再
灌注损伤等方面起到重要作用，和其他免疫性疾病也存在相关性[4-8]，但对其如何具体实现生物学效应尚不完全清楚。本实验通过建立哮喘小鼠气道重塑模型及1,25-(OH)2D3干预，观察哮喘小鼠气道重塑情况及TIM-4表达改变，进一步探讨哮喘发病机制，旨在发现哮喘治疗的新靶点。

1 材料和方法
1.1 实验材料
清洁级BALB / c小鼠30只,雌性, 6～8周龄,体重(20±2) g,购于华中科技大学同济医学院实验动物中心,许可证号:SC*K (鄂)2010-0007。鸡卵清蛋白( ovalbumin,OVA) ,购于Sigma 公司。1,25-(OH)2D3购于Sigma公司。Trizol、反转录试剂盒和PCR 试剂购于北京全式金生物技术有限公司。免疫组化一抗购于北京博奥森生物技术有限公司；二抗及显色剂购于北京中山生物技术有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组和哮喘小鼠模型的制备 按随机化原则将30只小鼠分为哮喘组、1,25-(OH)2D3干预组、生理盐水对照组，每组10只。适应性饲养1周后，参照文献[3、4]加以改进,制备动物模型。哮喘组、1,25-(OH)2D3干预组小鼠分别在第1、8、15天腹腔内注射抗原混合液0. 2 mL(含OVA 50μg、10%氢氧化铝0.15ml和生理盐水0.05ml)致敏,第22天开始雾化吸入1% OVA激发，每日1次,每次30 min,持续至第35天,共计14次。1,25-(OH)2D3干预组每次激发前0.5h给予腹腔内注射1,25-(OH)2D3 混合液0.1ml（含1,25-(OH)2D3 0.1ug、无水乙醇2.5ul、生理盐水0.1ml）[5]，哮喘组以生理盐水代替。对照组小鼠的腹腔内注射、雾化吸入及雾化吸入前腹腔注射均用生理盐水代替,次数同前。
1.2.2 肺组织标本制备 各组小鼠于末次雾化结束后24h内以乙醚吸入麻醉，开胸，结扎左肺门，取出左肺，放于液氮中冻存，留做RT-PCR标本；经右心室插管至肺动脉，用生理盐水快速冲洗至无血液流出，肺叶颜色呈白色后，换4%甲醛溶液冲洗，进行内固定，取出右肺中叶，置于4%甲醛溶液中进行外固定48h，酒精梯度脱水，石蜡包埋，3um厚度切片，分别留做HE染色及免疫组织化学染色标本。
1.2.3 HE及免疫组化染色观察 石蜡切片脱蜡后，使用苏木精-伊红进行染色，观察支气管壁的形态学改变，测定相同 ……（未完，全文共8800字，当前仅显示2403字，请阅读下面提示信息。收藏《医学论文：1,25-(OH)2D3干预下哮喘小鼠TIM-4蛋白及mRNA的表达》）