论文开题报告书：羰基还原酶的制备纯化及在立体醇制备中的应用

大学本科毕业论文(设计)开题报告
学院：　化工学院 　　　　　　　　　　专业班级： 09级生物技术1班　

课题名称 羰基还原酶的制备纯化及在立体醇制备中的应用

1、本课题的的研究目的和意义：
辅酶的再生与截留是实现多酶连续催化的重要条件。通过将辅酶和酶与立体醇的共价结合，实现辅酶的再生和截留，让酶及辅酶能多次循环使用。

2、 文献综述（国内外研究情况及其发展）：
立体选择性氧化还原酶是一种重要的生物催化剂，被广泛用于不对称合成医药、化工、农业、食品等不同领域的众多功能性手性化合物，因其独特的优越性，成为近年来国内外研究的热点。

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4、拟解决的关键问题：
困难一： 菌株的活化
困难二： 纯化过程条件

5、研究思路、方法和步骤：
一．近平滑假丝酵母的活化(将安瓿管的菌种接种于斜面和培养皿上培养,诱导菌株变异，放入保温箱培养,筛选生长良好的菌株,继续培养)
二．近平滑假丝酵母的培养(培养皿挑去酵母细胞接种于100mL的液体培养基,培养,提取
粗酶液,离心,超声破碎,提取上清液即为酶液)
三．酶活的测定(酶活的计算公式为：酶活（U）=EW*V*103/(6220*1))
四．羰基还原酶的纯化(三步纯化：1、超声波破碎2、乙醇沉淀3、亲和层析blue sepharose 6 Fast Flow 纯化）

五．构建偶联体系，使羰基还原酶和甲醇脱氢酶实现耦合，循环使用。


6、本课题的进度安排：
二月中旬----三月初，近平滑假丝酵母的活化;
三月初----三月20号，近平滑假丝酵母的培养,酶活的测定；
四月初----四月中旬，羰基还原酶的纯化;
四月中旬----五月，共价偶联体系的构建，实现酶及辅酶的再生及截留。



7、参考文献:
1.羊明，徐岩，穆晓清，肖荣，近平滑假丝酵母NAD(H)依赖性次级醇脱氢酶的分离纯化及酶学性质，应用与环境生物学报，2007.13(1):121-125
2.解晴，吴坚平，林立，徐刚，杨立荣，拟热带假丝酵母中羰基还原酶的纯化及其酶学性质研究，高校化学工程学报，2009,2
3.聂尧，徐岩，全细胞近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis)SYB-1不对称转化苯基乙二醇，过程工程学报，2003.2
4.李凌凌，吕早生，吴敏，袁向利，关海燕，张敏，醛酮还原酶及其在不对称合成手性醇中的应用，化学与生物工程，2009.
5.聂尧，徐岩，新型辅酶依赖型立体选择性氧化还原酶性质的初步研究，生物加工工程，2003.5
6.羊明，徐岩，穆晓清，肖荣，一种新的高立体选择性羰基还原酶的性质及分离，化工进展，206
7.lqbal,M Baloch,IB Baloch,MK An efficient method for the preparation of benzyl gamma-ketohe*anoates, CHEMICAL PAPERS, ……（未完，全文共2025字，当前仅显示1288字，请阅读下面提示信息。收藏《论文开题报告书：羰基还原酶的制备纯化及在立体醇制备中的应用》）