论文开题：闽南药用植物菌根多样性研究

大学本科毕业论文(设计)开题报告
学院：化工学院　　　　　　　　　　　　　专业班级：园艺（观赏园艺）　
课题名称 闽南药用植物菌根多样性研究

1、本课题的的研究目的和意义：
闽南药用植物面临掠夺式开采，致使其越来越少，有的种类濒临枯竭，乱施化肥、农药造成的质量不稳定、农残超标，栽培措施不配套造成的产量、质量下降等，严重威胁了其入药的安全性、稳定性、有效性。与其互利共生的AM真菌能帮助药用植物吸收磷、钾等营养元素及水分，对重金属也有“解毒”功能及其他抗逆作用，使药用植物获得较好的增产并提高品质。 本课题目的在于分析野生药用植物丛植菌根多样性，为丛植菌根真菌在药用植物上的应用提供理论基础。


2、文献综述（国内外研究情况及其发展）：
由于全球生态环境日益恶化、生物多样性减少、植被退化、资源枯竭等问题严重，世界发达国家都十分重视对AM真菌的资源保护和调查工作。我国近年来在该领域也开展了大量调查工作，而对于药用植物AM真菌的研究报道较少。AM真菌广泛分布于陆地生态系统中，能与绝大多数高等植物形成共生体系。大量研究证实，AM真菌能够扩大植物根系吸收面积，增强宿主植物对土壤养分和水分的吸收利用，提高植物抗病性和抗
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5、研究思路、方法和步骤：
一、菌根定植率的测定：AM真菌菌根的染色和定殖率按Phillips和Hayman(1970)方法测定。
采用KOH透明─乳酸甘油酸性品红紫色法。具体作法：洗净根系→把根剪成0.5～1cm根段约50段放入试管中→洗净泥沙浸泡，5min→FAA溶液15mL，固定24h→加10%KOH（透明），10min→水浴90℃，20min→水洗3次→酸化加入2%HCl，5min→去掉酸液加入染色剂→水浴90℃，10min→乳酸分色→镜检测定，计算出AM定植率、丛枝着生率和单位根长泡囊数。
先挑选30个细小根段压片，在显微镜下观察菌根结构并拍照，测定感染根段数（含有AM真菌菌丝、泡囊、丛枝、或孢子之一者视为感染根段）。
菌根定植率按照Abbot等的方法来统计， 即被侵染的根段数占镜检总根段数的百分比。按照如下公式计算菌根感染率：
菌根定植率(% )=有菌根感染的根段数／检查根段总数*100%
根据AM真菌侵染分级计算对根样侵染做出评估，估测整个样品根系被AM 真菌侵染的营养根的数目，将评估等级分为5 个等级，0～5%为1级；6%～25%为2级；26%～50%为3级；51%～75%为4级；76%～100%为5级。
二、 AM真菌孢子的分离和鉴定
1、AM真菌孢子的分离：取土样25g于大烧杯中加水搅拌→静止30分多次摇匀土样全部过筛→过筛40目/160目/325目，土粒冲洗干净→160目和325目筛上物装入离心管→3000rpm，3min→去掉上清液→加入60%蔗糖→搅匀→1500rpm，2min →上清液过325目筛→镜检。
2、真菌孢子的鉴定方法：在体视显微镜下观察记录孢子数量、颜色、大小、连孢菌丝特征、孢子果形态等，然后挑取孢子置于载玻片上，加不同浮载剂(水、Melzer‘s试剂、PVLG (聚乙烯醇-乳酸-甘油))进行压片，在生物显微镜下测量孢子的大小、厚度，观察孢子的颜色、纹饰、类型等特征并进行拍照。
三、土壤理化性质的测定
将采回的土样，放在木盘中或塑料布上，摊成薄薄的一层，置于室内通风阴干。风干后的土样，倒入钢玻璃底的木盘上，用木棍研细，使之全部通过2mm孔径的筛子。充分混匀后用四分法分成两份，一份作为物理分析用，另一份作为化学分析用。作为化学分析用的土样还必须进一步研细，使之全部通过1mm或0.5mm孔径的筛子。
土壤含水量、有机质、碱解氮、速效磷、速效钾、电导率、pH测定分别采用烘干法、重铬酸钾容量法、碱解扩散法、NH4F-HCl法、硝酸溶液浸提−火焰光度法、电导率仪、pH仪。pH测定时的水土比为5∶1。
四、多样性分析：参照张美庆等(1998)方法计算AM真菌丰富度(SR)、密度(SD)、频度(F)、相对多度(RA)、Shannon-Wiener多样性指数（H）和物质均匀度（J）。孢子密度度( SD )指植物根际100 g土壤中所含的孢子数：公式为SD=所有孢子数/土壤总样本数。
物种丰富度( SR )指植物根际100 g土壤中含有的AM真菌种的数目：
SR = AM 真菌总种数/土壤总样本数。
频度( F) 指出现频率，指该种真菌的出现次数占所有物种出现次数之和：
F= (某属或种的出现次数/土样数) *100%
相对多度( RA)指种的个体数在群落总物种数中的比率：
RA= n(某属或种的孢子数) /N (该地区AM 真菌孢子总数) *100%
重要值I = (F+RA)/2，即分离频度和相对多度的平均值。将AM真菌优势度按重要值(I)划分为4个等级，即I＞60%为优势属(种)，40%＜I≤60%为最常见属(种)，20%＜I≤40%为常见属(种)，I≤20%为稀有属(种)。
Shannon-Weiner物种多样性指数(H)：假设有1个包含N 个体的随机样本，其种i的个体数为Ni ，则Pi = Ni/N.故H可用下式估计：

式中： k为某样点中AM真菌的种数；Pi为该样点AM真菌种i的孢子密度占该样点总孢子密度的百分比。
物种均匀度J=H/lnS, H为Shannon-Weiner指数，S为采样点AM真菌种数目。



式中： k为某样点中AM真菌的种数；Pi为该样点AM真菌种i的孢子密度占该样点总孢子密度的 ……（未完，全文共4574字，当前仅显示2310字，请阅读下面提示信息。收藏《论文开题：闽南药用植物菌根多样性研究》）