论文开题：植物抗寒、低木质素双向表达载体的构建

大学本科毕业论文(设计)开题报告
学院：化工学院 专业班级：生物技术

课题名称 植物抗寒、低木质素双向表达载体的构建

1、本课题的的研究目的和意义：
多基因转化技术是现在生物技术的一个重要研究方向，双向启动子技术为多个基因同时调控植物成为一个可能。本项目利用双向启动子载体，构建抗寒基因SOD和调控木质素基因4CL1的融合基因，转化桉树植株，在调控的木质素含量的同时，增强桉树的抗寒性，为桉树转基因研
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的启动子数目，更不必担心引入生物体内的启动子之间序列同源而导致的转基因_现象的发生。 目前，利用双向启动子进行转基因研究的例子并不多，并且多数为人工构建的双向启动子。利用天然双向启动子进行转基因研究的重点仍然放在双向启动子的克隆与功能分析上。无论怎样，双向启动子的应用为解决转基因技术难题提供了可能，在基因工程研究和应用领域具有不可估量的作用，正成为转基因技术研究的新领域。
3、 本课题的主要研究内容（提纲）和成果形式：
借助北京林业大学蒋湘宁教授实验室的高效双向启动子载体CaMV35S-mini35S载体，将高效表达的SOD基因和阻断木质素合成的反义4CL1基因构建到这个载体上，转化桉树植株，获得同时具有抗寒性和低木质素优点的双转基因桉树。
成果形式





4、拟解决的关键问题：
高效表达的SOD基因和阻断木质素合成的反义4CL1基因构与载体的连接
5、研究思路、方法和步骤：
一、克隆4CL1反义基因并与双向启动子载体连接
1)碱裂解法提取CHFA1质粒
2)4CL1反义基因扩增
3)4CL1 PCR纯化产物与pMD18-T载体连接
4)pBDGG和pFA1的双酶切与连接
二、克隆SOD基因及与pBDFA1连接
1)SOD基因扩增
2)PCR纯化产物与pMD18-T载体连接
3)双酶切与连接
6、本课题的进度安排：
2011.11.1-2011.12.1 反义4CL1基因和SOD基因的克隆载体构建
2011.12.2-2012.1.1 反义4CL1基因片段与双向载体pBDGR的酶切连接及阳性克隆子的验证
2012.1.2-2012.2.2 SOD基因片段与前面的阳性克隆子载体的酶切连接及阳性克隆子的验证
7、参考文献：
[ 1 ] 刘石娟, 郑成超. 真核生物双向启动子的结构与功能[J]. 中国生物化学与分子生物学报 , 2011,(10)
[ 2 ] 赖鹏程. 高等植物特异启 ……（未完，全文共1701字，当前仅显示1081字，请阅读下面提示信息。收藏《论文开题：植物抗寒、低木质素双向表达载体的构建》）