论文开题：碱性蛋白酶生产菌株的筛选及鉴定及蛋白酶基因的克隆（5）

目录/提纲：……
一、根据细菌形成的菌落的形态学特征进行简单的菌种鉴定
二、在光学显微镜下观察，进行单个细胞大小、形状的鉴定
三、分子水平上鉴定，即通过测定菌株的16SrRNA进行鉴定
四、通过分析菌株的功能蛋白进行鉴定
2、菌株染色体DNA中G+C含量的测定
3、气相色谱分析菌株细胞脂肪酸含量
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大学本科毕业论文(设计)开题报告
学院：　　　化工学院　　　　　　　　　　专业班级：　08生物技术

课题名称 碱性蛋白酶生产菌株的筛选及鉴定及蛋白酶基因的克隆（5）

1、本课题的的研究目的和意义：
低温细菌是泛指对低温具有生长适应能力的所有细菌。按照最适生长温度和生长上限温度的不同，它们一般被分为2大类：嗜冷型(Psychrophilic)和耐冷型(Psychrotrophic或Psychrotolerant)。
北极由于独特的地理和气候特征，形成了一个干燥、寒冷、强辐射的自然环境，生活在其中的微生物能成功地适应其特殊的环境，并成功地生长繁殖，它们必然具备各样的适应机制。其中，酶的代谢合成、分子结构变化以及酶的生化功能，在微生物的适冷机制上扮演重要角色。通过对北极细菌的研究，进一步探寻其胞外蛋白酶的特性，以期为极地微生物产低温蛋白酶的低温适应性研究和其实际应用打下一定的基础。低温酶在低温条件下催化效率高和对热敏感等特点， 使其在工业应用和基础研究中都具有广泛的研究
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有Pseudomonas，其次还有*anthomonas，Azospirillum等属。
从20世纪90年代初，国内一些机构开始了针对极地微生物的初步收集、调查与研究工作。近二十几年来，随着国际上对极地微生物研究热度的逐步加强，以及国内科研人员对极地微生物及其产物在学术研究和生物工程中潜在价值的不断认识，中科院、国家海洋局及水产科学院下属的部分研究所及部分大学已经在低温微生物及其酶类以及低温菌株的分子鉴定与系统发育等方面开展了一些研究工作并取得了部分成果。


3、 本课题的主要研究内容（提纲）和成果形式：
本课题是对产碱性蛋白酶菌株vv52进行菌种鉴定。首先提取基因组DNA，然后利用PCR体外扩增16s rDNA片段，最后经GeneBank或者Ezta*on对比。一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌。课题成果采取论文的形式。
一、根据细菌形成的菌落的形态学特征进行简单的菌种鉴定；
二、在光学显微镜下观察，进行单个细胞大小、形状的鉴定；
三、分子水平上鉴定，即通过测定菌株的16SrRNA进行鉴定；
四、通过分析菌株的功能蛋白进行鉴定。










4、拟解决的关键问题：

1、PCR扩增16s rDNA片段，进行序列测定并经行GeneBank或者Ezta*on对比，构建系统发育树。
2、菌株染色体DNA中G+C含量的测定。
3、气相色谱分析菌株细胞脂肪酸含量。







5、研究思路、方法和步骤：
1、vv52菌株于2216E液体培养基中活化培养；
2、细菌形态学鉴定
观察菌落，个体形态、颜色、运动性，革兰氏染色、荚膜染色、结晶紫染色、水制片观察；
3、菌株基因组总DNA的提取和检测；
4、菌株16S rRNA基因酶切分析、序列比对及系统进化树分析；
5、菌株最适酶活温度的测定；
6、不同温度下生长曲线的测定；
7、抗菌性分析：
主要研究对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性；
8、基因组DNA中G＋C mol％含量的测定：
采用Tm值法或高效液相色谱分析方法；
9、气相色谱法分析细菌中脂肪酸含量；



6、本课题的进度安排：
1、2012年2月20日至2012年3月25日，进行细菌常规鉴定。常规鉴定内容有形态学鉴定和理化特性鉴定。形态特征包括显微镜单细胞形态特征和菌落特征。理化特性包括：营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应等。
2、2012年3月25日至2012年4月28日，提取细菌基因组DNA后进行PCR扩增16S rRNA片段，然后PCR扩增16S rRNA到23SrRNA之间的片段。进行序列测定并上GeneBank或者Ezta*on对比，构建系统发育树。细菌染色体DNA中G+C含量的测定。
3、2012年4月29日至2012年5月19日,分析细菌细胞中脂肪酸含量,利用细菌微量生化反应管鉴定细菌。



7、参考文献：
[1] 王全富, 缪锦来, 李光友等．南极微生物产低温蛋白酶菌株的筛选、分子鉴定及部分酶活特性［J］.中国水产科学, 2005, 12(4): 437 – 444。
[2] 徐国英, 林学政, 王能飞等.产低温蛋白酶极地菌株的筛选及Pseudoalteromonas sp.QI-1产蛋白酶粗酶性质［J］.生物加工过程, 2010, 8(2): 55 – 60。
[3] 闫志勇1 , 毕春霞2 , 辛晓妮1 , 罗　玮1 , 代玉梅1 , 王　斌. 1株高产蛋白酶嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及其酶学活性的研究. 微生物学杂志, 1005 - 7021 ( ……（未完，全文共3943字，当前仅显示1992字，请阅读下面提示信息。收藏《论文开题：碱性蛋白酶生产菌株的筛选及鉴定及蛋白酶基因的克隆（5）》）