论文开题报告：橄榄叶中生物活性天然产物的分离与检测

大学本科毕业论文(设计)开题报告
学院：　化工学院　　　　　　　专业班级：　2009级生物技术一班
课题名称 橄榄叶中生物活性天然产物的分离与检测

1、本课题的的研究目的和意义：
从橄榄叶中提取多酚类生物活性物质一直是研究重点。本课题的研究重点是从橄榄叶中分离提取到橄榄苦甙化合物。橄榄苦苷具有抗氧化、抗真菌、抗炎、抗病毒、预防冠心病、动脉粥样硬化、舒缓血管平滑肌、抗氧化、抗癌和降血糖等多种药理作用。目前的分离技术主要有超临界萃取法，索氏提取法和微波提取法。我们的想法则是运用廉价的离子树脂法来分离得到天然产物橄榄苦苷以及检测相关产物活性。

2、 文献综述（国内外研究情况及其发展）：
国外关于油橄榄的研究已从有效成分的分离及结构鉴定转化为对其生物活性及其中有效成分含量变化规律的研究。国内研究仅限予用油橄榄果榨取橄榄油，油橄榄的其
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)3一NaOH体系显色后于510nm处可测得油橄榄叶总黄酮和橄榄苦苷的吸光度之和；而以AlCl3体系显色后于415nm处仅测得总黄酮的吸光度，橄榄苦苷无吸收。利片橄榄苦苷在两种显色体系中的吸收特性差别，通过差减法换算后可间接测定样品中橄榄苦苷的含量。以UV—Vis差减法测得油橄榄叶及其纯化浸膏中橄榄苦苷的平均含量分别为11.6％和63.4％，3次测定的相对标准偏差(RSD)分别为1.5％和1.2％，其结果与高效液相色谱法(HPLC)测定结果的相对误差小于4％。该方法可替代HPLC用于油橄榄叶中橄榄苦苷的含量测定，为油橄榄叶及其制品的质量控制提供了一种快速、简便、成本低廉的分析方法。


3、 本课题的主要研究内容（提纲）和成果形式：
本课题从分离测定方面入手，主要研究使用何种廉价的大孔树脂来吸附纯化橄榄苦苷的初提物，继而研究吸附纯化当中的各种影响要素，如吸附时间，解吸液的浓度，上样量的质量浓度以及洗脱剂用量等对纯化效果的影响。选其最优要素对初提物的纯化，再用事先研究的光度法测定其橄榄苦苷的含量。通过大孔纯化的初提物中的橄榄苦苷的含量明显提高，继而用葡聚糖凝胶进一步的纯化，使橄榄苦苷的纯度再一次的提升，等于说其活性进一步得到了提升，再用光度法测其橄榄苦苷的含量。


成果形式以最后得到的产物、硅胶薄层点板的样板、毕业论文的形式呈现。



4、拟解决的关键问题：
如何再现应用光度法测定橄榄苦苷的含量
如何用硅胶薄层点板判断梯度洗脱的终点



5、研究思路、方法和步骤：
本课题从橄榄苦苷等多酚类物质的理化性质，分子量大小和极性等方面着手从橄榄叶中来分离纯化橄榄苦苷，其间最重要的一环则是用简易的光度法测量橄榄苦苷的纯度来代替繁琐的高效液相色谱检测方法。

具体方法：
①首先利用橄榄苦苷的溶解性质（易溶于甲醇）对橄榄苦苷进行初步提取，将树叶浸泡于甲醇中10天左右，反复浸泡树叶约2到3次，周期为10天左右。
②将上述初提物取部分用旋转蒸发仪将初提物蒸干，测其质量。再用蒸馏水溶解，取适当溶解液在大孔树脂中上样，待其完全吸附约5h，再用不同梯度的甲醇（0%，10%，20%，40%，60%，100%）进行洗脱，洗脱剂量按硅胶点板定量。洗脱时须用不同锥形瓶收取洗脱液。
③用硅胶薄层点板进行点样，样品为锥形瓶内洗脱液，用此方法合并相同梯度内的不同锥形瓶内的洗脱液。用光度法进行检测含量，确定含量最高的那个锥形瓶。
④将含量最高的锥形瓶内的洗脱液蒸干称重，加蒸馏水溶解，用葡聚糖凝胶柱层析进行再次纯化，用上述相同方法进行洗脱，收集洗脱液，再次点板，用光度法进行检测，确定最终纯化的效果。
⑤后续工作为用高效液相色谱再次检测，还有就是进行一些测定活性方面的工作。





6、本课题的进度安排：
2012.11-2012.12 采集5kg的橄榄树叶作为原料并将原料磨碎浸泡于工业甲醇中，浸泡时间半个月。
2012.12-2013.1 将小部分初提物于葡聚糖凝胶进行过柱分离并用梯度洗脱方法进行洗脱。
2013.3-20 ……（未完，全文共3337字，当前仅显示1686字，请阅读下面提示信息。收藏《论文开题报告：橄榄叶中生物活性天然产物的分离与检测》）