论文开题报告：基于TRAP标记的半夏遗传多样性研究

大学本科毕业论文(设计)开题报告
学院：　化工学院　　　　　　　　　　　　专业班级：　08园艺　
课题名称 基于TRAP标记的半夏遗传多样性研究

1、本课题的的研究目的和意义：

遗传多样性是物种和生态多样性的基础，一般指种内不同_和个体遗传多态性程度即种内基因变化。 种内遗传多样性丰富，物种对环境的变化适应能力强，进化潜力大。 由于现在半夏盲目引种，栽培不规范及栽培环境不合格导致半夏种内基因变异及品种退化，药材产量下降，影响经济效益，开展遗传多样性研究对半夏分类，品种鉴定，引种和培育新品种具有巨大意义。

2、 文献综述（国内外研究情况及其发展）：


靶位区域扩增多态性(Target Region Amplified Polymorphism,TRAP) 是一种新型的基于 PCR的分
……（新文秘网https://www.wm114.cn省略582字，正式会员可完整阅读）……　
、亲缘关系和遗传多样性等方面取得了进展．
3、 本课题的主要研究内容（提纲）和成果形式：
1.提取半夏材料基因组DNA。
2.用已筛选的引物组合对全国不同产地和表型的半夏居群DNA进行TRAP遗传多样性分析。
4、拟解决的关键问题：

做聚丙烯下难凝胶电泳时，保证上样孔的平整，上样时使产物和溴酚蓝混合均匀，电泳条带清晰。

5、研究思路、方法和步骤：

步骤：（1）依次用H2O、ddH2O充分洗涤玻璃板和间隔片，再用无水乙醇擦拭玻璃板，晾干。直接用无水乙醇清洗样品梳。
（2）凝胶膜板的装配：
①将较大的（不带凹口）玻璃板平放在实验台上。
②用少量凡士林轻涂间隔片，防止其滑动。
③将内板（带凹口的玻璃板）放在（不带凹口）玻璃板上，放妥。
④用夹子将两玻板夹紧，为防止漏胶，底边用防水胶带密封。
⑤将两玻板夹在制胶板上，并放入琼脂糖密封槽中。注意：玻板要放在密封槽的中间，使玻板的四周都留有空间，以便琼脂糖能够流到玻板的前后左右。
⑥制备一定量（每块胶约需30ml）的1%的琼脂糖溶液，加热使之透明澄清。趁热倒入琼脂糖密封槽中，胶凝固后可以密封玻板底部的侧面和底面。
（3）聚丙烯酰胺凝胶的制备
根据玻璃板大小及间隔片厚度计算所需凝胶体积，并配胶、灌胶。（注意：操作时要戴手套！并且在托盘上进行，以免溶液溅出！操作动作要迅速！）
①吸取9.95ml 30%丙烯酰胺、29.7ml dH2O、10ml 5*TBE放入小烧杯中，混匀。（6.0%的聚丙烯酰胺凝胶）
②再加入0.35ml 10%过硫酸胺、0.0175ml TEMED，轻轻旋转混匀。
③将垂直胶板略倾斜，小心将凝胶倒入两块玻璃板之间，待凝胶离板顶约3mm处停止。
④胶板垂直放好，插入合适的样品梳，勿使梳齿下形成气泡，若有气泡，用1mL注射器吸出。
⑤室温中聚合1~2h，若凝胶回缩明显，应补加。梳齿下出现折光带时，表明聚合反应已经完成。
（4）电泳
①聚合完成后，在梳子周围及其顶部喷些1*TBE，小心取出梳子。
②用1mL注射器吸取1*TBE冲洗加样孔，小心移去琼脂糖密封槽，用解剖刀小心除去凝胶底部的胶带，回收琼脂糖。
③将凝胶直立放入电泳槽，注意有凹口的玻璃板朝里，面向缓冲液槽放置，用夹板固定好。
④在电泳槽的上下槽中灌满1*TBE溶液，驱尽凝胶底部附着的气泡。用1*TBE溶液冲洗加样孔。
⑤微量移液器在点样板上：5μl DNA +1μl 6*Loading Buffer，充分吹吸混匀。上样时，切勿让样品溢出槽外。
⑥接通电源，正极与下槽相连。120V电压下电泳2.5h。
⑦电泳毕，从电泳槽中取出玻璃板，放在工作台上，用解剖刀从夹层一角轻撬，移去上面的玻板。用注射器针头使附着在间隔片内侧的凝胶脱离，再用ddH2O小心冲洗下凝胶，置染色液中染色并进行结果观察。
（5）染色
电泳后采用银染的方法，银染主要步骤：
(1)去离子水洗脱3min；
(2)浸泡于0.1%AgNO3染 ……（未完，全文共3235字，当前仅显示1634字，请阅读下面提示信息。收藏《论文开题报告：基于TRAP标记的半夏遗传多样性研究》）