毕业论文：橄榄叶等植物来源黄嘌呤氧化酶抑制剂活性研究

题目：橄榄叶等植物来源黄嘌呤氧化酶抑制剂活性研究
院（系） 化工学院
专 业 生物工程

橄榄叶等植物来源黄嘌呤氧化酶抑制剂活性研究
摘要
摘要：【目的】检测筛选橄榄叶等植物来源的活性成分对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。【方法】采用酶反应速率法测定样品对酶活性的抑制能力大小。【结果】在橄榄叶粗提物及其过色谱柱层析分离后的组分中，发现脂溶性粗提物总体上比水溶性粗提物效果好。11月份的抑制活性最高，其半数抑制浓度为253.25μg/mL，而当样品经过过柱分离纯化后，其中的小分子组分半数抑制浓度仅为72.34μg/mL，抑制活性增加了3.5倍。在9种中草药粗提物中，发现水溶性粗提物抑制效果总体优于脂溶性粗提物。其中葛花，猫须草，金银花三种药材的粗提物抑制效果最好，葛花的半数抑制浓度为647.17mg/mL，在三种水溶性粗提物中抑制效果最佳。对橄榄叶11月甲醇粗提物，过柱分离后的粗提物，葛花、猫须草水溶性粗提物做抑制类型检测，发现所有样品均为以竞争性抑制为主的复合抑制类型。【结论】从橄榄叶等植物来源的成分对黄嘌呤氧化酶都有较好的抑制效果，尤其橄榄叶的抑制效果明显优于另外9种中药，这为研究开发新的抗痛风药物开拓了新的视野和方向，为进一步分离纯化药效物质提供了参考。
关键词：橄榄叶；中草药；黄嘌呤氧化酶抑制剂；半数抑制浓度；抑制类型。


The research of inhibitory ability of *anthine o*idase inhibitors from olive leaves and other plant sources
Abstract
Abstract:[Objective] Detect and screen active ingredients of *anthine o*ida
……（新文秘网https://www.wm114.cn省略1265字，正式会员可完整阅读）……　
ected in November, small molecular components , flos puerariae and clerodendranthus spicatus water-soluble e*tracts , a mi*ed mode of inhibition was found, which give priority to competitive mode of inhibition. [Conclusion]All the e*tracts had inhibitory abilities, especially the ones from olive leaves ,which the effect of inhibition is obviously superior than any other Chinese herbal medicine e*tracts . The result opened up a new horizon and direction in the research and development for new drug of gout .
Key words: olive leaves; Chinese herbal medicine; *anthine o*idase inhibitors; inhibition concentration 50; inhibition mode.

摘要 I
Abstract II
第1章 绪论 2
1.1 概述 2
1.1.1黄嘌呤氧化酶概述 2
1.1.2黄嘌呤氧化酶抑制剂概述 2
1.1.3 橄榄叶研究现况 2
1.1.4 从中草药中提取黄嘌呤氧化酶抑制剂的研究现况 2
1.2 实验原理 2
1.2.1黄嘌呤氧化酶酶活力测定原理 2
1.2.2抑制类型判断原理 2
1.3 研究目的和意义 2
第2章 材料与方法 2
2.1试剂与仪器 2
2.1.1试剂与药品 2
2.1.2实验仪器 2
2.2实验材料 2
2.2.1.橄榄叶不同组分粗提物 2
2.2.2 中草药不同组分粗提物 2
2.2.3 中草药不同组分活性粗提物的提取 2
2.3 实验方法 2
2.3.1溶液配置 2
2.3.2检测方法 2
第3章 结果与讨论 2
3.1样品粗提物抑制率检测筛选方法的建立与优化 2
3.1.1反应体系体积比的优化 2
3.1.2反应体系底物浓度优化 2
3.1.3 反应操作条件优化 2
3.1.4 黄嘌呤氧化酶浓度优化 2
3.2实验结果 2
3.2.1橄榄叶活性组分粗提物初筛结果 2
3.2.2中草药活性组分粗提物初筛结果 2
3.3.3 橄榄叶活性组分粗提物半数抑制浓度 的计算 2
3.3.4 中草药水溶活性组分粗提物半数抑制浓度 计算 2
3.3.5样品抑制类型判定 2
3.3结果分析及讨论 2
3.3.1 橄榄叶粗提物结果讨论 2
3.3.2 中草药粗提物结果讨论 2
3.3.3 抑制类型结果讨论 2
第4章 结论和展望 2
4.1 结论 2
4.2 展望 2
参考文献 2
致谢 2













第1章 绪论
1.1 概述
1.1.1黄嘌呤氧化酶概述
黄嘌呤氧化酶( *anthine O*idase , *OD)， EC1．2．3．2，是一种黄素蛋白酶, 专一性不高，既能催化次黄嘌呤生成黄嘌呤，进而生成尿酸，又能直接催化黄嘌呤生成尿酸的酶，同时产生过氧化物_基，是体内核酸代谢中重要的酶，黄嘌呤氧化酶催化反应如下：
次黄嘌呤 + O+ → 黄嘌呤 +
黄嘌呤 + O + → 尿酸 +
黄嘌呤 + O + 2 → 尿酸 + 2 + 2
它存在于牛乳、动物特别是鸟类的肝脏与肾脏、昆虫、细菌中。分子量10几万―30几万。其底物专性较广，除以嘌呤衍生物为电子供体外，还可以蝶啶衍生物、醛（生成羧酸）为电子供体，表面上生成羟基化合物，氧原子来源于水。NADH也氧化。电子受体很多，有分子氧、硝酸盐、苯醌、硝基化合物、NAD 、铁氧还蛋白等，但依酶的来源而有所不同。在反应时生成过氧化物，引起连锁反应。黄嘌呤氧化酶的晶体结构已经被解析[1],它由1 330个氨基酸构成,由两个完全对称的结构单元构成。每一个结构单元为145 ku ,其催化中心包括一个钼蝶呤(Molybdopterin , Mo2pt) 中心、两个铁2硫中心(Iron2suL Furcenters , Fe/ S Ⅰ,Ⅱ) 和一个黄素腺嘌呤二核苷酸(FLavin Adenine DinucLeotide , FAD) ,其中钼蝶呤中心是黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤生成尿酸的关键位点。尿酸浓度过高将导致高尿酸血症, 可引起痛风发作，_基涉及到炎症等一系列病理过程。抑制黄嘌呤氧化酶的活性, 既可以减少体内尿酸的形成, 有效地阻止或延缓痛风及其并发症, 又可以减少_基造成的组织伤害。
1.1.2黄嘌呤氧化酶抑制剂概述
黄嘌呤氧化酶抑制剂作为抗痛风药物,从上世纪60 年代上市的别嘌呤醇,到后来的丙磺舒、苯溴马隆，以及秋水仙碱，都有很好的治疗作用。 其中别嘌呤醇通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性,减少黄嘌呤向尿酸的转化,从根本上减少体内尿酸的生成,从而达到治疗痛风的作用,自1963年用于临床以来,一直是一线抗痛风药。然而,应用后病人可能有发热、过敏性皮疹、腹痛、腹泻、白细胞及血小板减少等症状,甚至有肝功能损害等副作用。因此,研究新的黄嘌呤氧化酶抑制剂具有十分重要的意义。一些天然植物及中草药中富含丰富的黄酮类化合物及其他活性成分, 具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗癌、抗心脑血管疾病等多种药理作用，且根据已有的研究结果，这些活性成分对于黄嘌呤氧化酶具有很好的的抑制效果,使得植物和中草药来源的活性成分在研发黄嘌呤氧化酶抑制剂新药中颇具前景。[2]
1.1.3 橄榄叶研究现况
近年来，国内外对橄榄的研究主要集中在木犀科(OLeaceae)木犀榄属(OLea L．)的欧橄榄(木犀榄)OLeaeuropaea L．[3] 。长期以来，人们一直从橄榄油中提取有效活性成份，发现从橄榄油中得到的活性组分能够有效抑制黄嘌呤氧化酶的活性[4]，然而，生物学家发现，橄榄叶含有的抗氧化活性成份较之橄榄油更为突出(高100倍)，尤其是橄榄苦苷(oLeuropein)和黄酮类化合物在叶中的含量明显高于果实和 ……（未完，全文共19757字，当前仅显示3554字，请阅读下面提示信息。收藏《毕业论文：橄榄叶等植物来源黄嘌呤氧化酶抑制剂活性研究》）